内容紹介
実際に高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を使用するにあたって、より適切な結果を得るための指南書。 HPLCで実際に使用されているまたは行われている分離の方法をほぼすべて網羅して解説。液クロの分離法に関する注意事項や扱い方、どのような分析成分に適しているのかといったことから、各分離法の長所や短所など、実際に液クロを操作する人がさらに上手に液クロをつかいこなすためのコツやノウハウが満載。
目次
1章 概説
HPLCにける分離モード
吸着クロマトグラフィー/分配クロマトグラフィー/イオン交換クロマトグラフィー/サイズ排除クロマトグラフィー/その他のクロマトグラフィー
2章 順相クロマトグラフィーのコツ
順相クロマトグラフィーの定義
順相クロマトグラフィーで用いるシリカゲル
シリカゲルを用いた順相クロマトグラフィーのまとめ
3章 逆相クロマトグラフィーのコツ
カラムを調達するコツ
移動相を調製するコツ
試料溶媒の選定と注入量の設定のコツ
カラム保守のコツ
イオン性化合物を分析するコツ
イオン対試薬を使用するコツ
塩基性化合物と配位化合物の分析のコツ
生体試料を分析するコツ
高速分析のコツ
4章 イオン交換クロマトグラフィーのコツ
分離モデル
イオン交換体
アミノ酸の分析例
方法と装置/保持時間の調製方法
グリコヘモグロビンの分析例
方法と装置/溶質と移動相の関係
イオン排除クロマトグラフィー
方法/有機酸の分析例
イオン交換クロマトグラフィーのコツ
カビ/結晶/カラムの取り扱い/フィルター類/ガードカラム/緩衝液・溶離液の調製
5章 サイズ排除クロマトグラフィーのコツ
SEC分離の特徴
カラムの選択
非水系SECカラム/水系SECカラム
溶離液の選択
溶離液適正化の基本/非水系SECカラムの溶離液/水系SECカラムの溶離液/溶離液と試料溶液の調製
検出器
較正曲線(calibratin curve)の作成
測定条件
試料注入量
SECを用いた高分子分析の一例
トラブル対応:カラムの劣化と対策
カラムの保管
6章 イオン対クロマトグラフィーのコツ
イオン性物質の分析方法
イオン対試薬
イオン対試薬の選び方
移動相の調整方法
濃度 pH
分離例
カラムへの影響
おわりに
7章 配位子交換クロマトグラフィーのコツ
配位子交換クロマトグラフィー
キラル配位子交換クロマトグラフィー
8章 疎水性相互作用クロマトグラフィーのコツ
疎水性相互作用クロマトグラフィーとは
HICを行う際の留意点
分離担体の選択/精製条件の設定/その他
HICの操作方法と使用例
9章 アフィニティークロマトグラフィーのコツ
群特異性アフィニティー担体を用いたアフィニティークロマトグラフィー
TSKgel Boronate-5pw/TSKgel Heparin-5PW/TSKgel ABA-5PW/TSKgel Blue-5PW/TSKgel Chelate-5pw
群特異性アフィニティークロマトグラフィーを用いた応用例
TSKgel Boronate-5PWによる応用/TSKgel Heparin-5PWによる応用例/TSKgel ABA-5PWによる応用例/TSKgel Blue-5PWによる応用例/TSKgel Chelate-5PWによる応用例
活性化型アフィニティー担体を用いたアフィニティークロマトグラフィー
TSKgel Tresyl-5PWの性質/抗体の固定化/カラムへの充填/ブロッキング/溶出法/免疫吸着体の安定性
活性化型アフィニティークロマトグラフィーを用いた応用例
アルブミン/IgG/トランスフェリン/IgM/オロソムコイド/プラスミノーゲン
おわりに
10章 ケモアフィニティークロマトグラフィーのコツ
ケモアフィニティー担体とケモアフィニティークロマトグラフィー
おわりに
11章 金属イオンアフィニティークロマトグラフィーのコツ
溶離条件の検討
金属イオン/溶離液
応用例
粗トリプシンの分離/モノクロナール抗体の分離/酵母酵素抽出液/ペクチナーゼの分離
おわりに
12章 親水性相互作用クロマトグラフィーのコツ
親水性相互作用クロマトグラフィーとは
どんなカラムが用いられるか
シリカゲル/アミノプロピルシリカゲル/両性イオン基結合充填材
移動相
分離例
13章 キラル分離クロマトグラフィーのコツ
キラル固定相の種類と特徴
低分子系キラル固定相/高分子系キラル固定相
ちょっと詳しいキラル分離クロマトグラフィーのコツ
キラル固定相の選択/光学異性体の溶出順/共存成分の影響/複数カラム接続法/カラム温度/試料の誘導体化/カラムの保守,使用上の注意点
おわりに
14章 銀クロマトグラフィーのコツ
分離メカニズム
HPLCカラムの選択
硝酸銀担持シリカゲルカラム/陽イオン交換カラムに銀イオンを固定化したカラム
応用例
脂肪酸メチルエステル類(FAMEs)の分離/トリアシルグリセロール類の分離
15章 分子鋳型クロマトグラフィーのコツ
分子鋳型クロマトグラフィーとは
分子鋳型の原理
モレキュラーインプリントポリマーの合成
材料/合成の手順/合成に際しての要点
分子鋳型クロマトグラフィーの特長・課題
担体合成方法の検討
重合法/鋳型分子
分子鋳型クロマトグラフィーの応用
16章 モノリスクロマトグラフィーのコツ
モノリスカラムの構造
モノリスカラムの特長
シリカ系モノリスカラム/ポリマー系モノリスカラム
シリカ系モノリスカラムの使用上の注意点
シリカ系モノリスカラムの応用例
その他のモノリスカラム応用例
17章 イオンクロマトグラフィーのコツ
ICの特徴と利点
ICの応用分野
ICの基本原理
装置構成/送液部/試料導入部
分離部
検出部
分析をうまく行うコツ
クロマトグラムに影響を与える要因/カラム,溶離液の温度の影響/溶離液の濃度と組成/溶離液の流量/溶離液中の不純物
試料の処理
沪過/希釈/固相カートリッジや限外沪過膜の影響/その他の処理
18章 分取クロマトグラフィーのコツ
シリカゲルの選択
精製の目的/試料の分子サイズとシリカゲルの細孔径/シリカゲルの粒子径/分離モードの選択
カラムの選択
カラムサイズ/カラム段数/圧力損失/負荷量/最適流速/充填/コスト/分取実例
高性能シリカゲルの開発
今後の展望
19章 擬似移動床法クロマトグラフィーのコツ
疑似移動床法クロマトグラフィーの原理
疑似移動床法クロマトグラフィーの応用例
VARICOL
おわりに
20章 動電クロマトグラフィーのコツ
キャピラリー電気泳動
動電クロマトグラフィー
21章 超臨界流体クロマトグラフィーのコツ
超臨界流体をクロマトグラフィーの移動相として用いたときの利点
SFCシステム
SFCシステムの流路と装置構成例/送液ポンプ/試料注入装置/背圧制御弁/分離のパラメーターとグラジエント溶出法/検出器/カラム
応用例
まとめ
22章 グラジエントクロマトグラフィーのコツ
HPLCにおける溶離法の種類
グラジエントクロマトグラフィーのシステム
グラジエントクロマトグラフィーにおける注意点とコツ
ゴーストピークとベースライン変動/カラムとシステムの平衡化/グラジエントの設定と実際の違い/短時間内の意図どおりのグラジエント作成法/グラジエント時の溶離挙動の予測