内容紹介

高速液体クロマトグラフィー（HPLC）分析をツールとする利用者向けの、コツ・ノウハウをまとめた実用書。日常のHPLC分析で、日々遭遇するさまざまなトラブルの解決にどれたけ苦労し、またどれだけの時間が割かれていることであろうか。そんな局面に、効率的に立ち向かうための実験上のポイントをわかりやすく解説。コツの習得には知識と経験が不可欠。本書をもとに自らの工夫を凝らし、自分流のコツを熟成し、実際に役立つコツを身につけられる。

目次

第I部　液クロ準備編
　１章　概論
　　コツの本質
　　コツの習得
　　試料前処理のコツ
　　装置選定のコツ
　　カラム分離のコツ
　　検出法のコツ
　２章　試料前処理のコツ
　　前処理の基礎知識
　　　前処理の必要性／理想的な試料前処理法／代表的前処理法について
　　固相抽出法実施にあたってのコツ
　　　試料前処理を検討する前に／固相の種類／固相の選択方法／逆相固相抽出法におけるトラブルの原因／逆相固相抽出法にけるトラブルの改善方法
　３章　試薬・溶媒選定のコツ
　　試薬・溶媒のグレード
　　移動相に用いる有機溶媒のグレードの違いと選択
　　試薬・溶媒の用途
　　使用目的別試薬・溶媒選択
　　　移動相用有機溶媒／試料溶媒／緩衝液用試薬／イオン対試薬／誘導体化試薬
　４章　溶離液調製のコツ
　　　使用する試薬・溶媒について
　　　　紫外吸収／安定剤／その他
　　　混合・調製方法について
　　　　有機溶媒―水系の場合／有機溶媒―緩衝液の場合／緩衝液の調製方法
　　　保管容器について
　　溶離液の寿命
　　溶離液の表示
　５章　装置選定のコツ
　　導入時の留意点―汎用ＨＰＬＣの高い完成度のもとで
　　　主力ＨＰＬＣモデル名と主要なコンセプト・価格・費用／まだまだ流行の“ワークステーション”／バカにならない修理費対策
　　最新のセミミクロＬＣ，キャピラリーＬＣ，ＬＣ/ＭＳ
　　ＨＰＬＣを初めて導入する場合
　　ＨＰＬＣメーカー，代理店の新人営業マン諸君に
　　私が忌避するメーカー
　６章　カラム選定のコツ
　　分離モードについて
　　　順相クロマトグラフィー／逆相（分配）クロマトグラフィー／親水性相互作用クロマトグラフィー／イオン交換クロマトグラフィー／サイズ排除クロマトグラフィー
　　逆相カラムの基礎知識
　　　逆相カラム充填剤担体と使用条件／ピークテーリングの原因について／ピークテーリングの対策について　　
　７章　液クロにおけるバリデーションのコツ
　　バリデーション概略
　　ＨＰＬＣシステム（モジュール別）のバリデーション概略
　　バリデーションのための参考資料の入手およびＳＯＰの作成のコツ
　　各モジュールのバリデーション項目の詳細
　　　ポンプ／オートサンプラー／カラムオープン／検出器（ＵＶ検出器）／データ処理装置
　　ＨＰＬＣシステムのシステム適合性試験　　
第II部　液クロ分離編
　８章　逆相分離のコツ
　　逆相（分配）クロマトグラフィーの特徴
　　逆相クロマトグラフィーの選択性に影響を与えるファクター
　　　固定相／測定対象成分／移動相
　　逆相イオン対クロマトグラフィーにおける注意点
　９章　順相分離のコツ
　　順相とは
　　順相分離に用いられる固定相と移動相
　　　固定相／移動相
　　順相分離のコツ――メソッド開発・操作上の注意点
　　　順相分離はどのような場合に適用すればよいか／順相分離特有のトラブルにはどのようなものがあるか／測定条件切り替え時に注意することは何か／有機溶媒の取り扱い時の注意点は何か
　　光学異性体の分離
　10章　イオン変換分離のコツ
　　イオン交換クロマトグラフィーの基礎
　　応用例
　　　ｐＨグラジエントを用いたアミノ酸の測定例／溶離液への有機溶媒の増加／イオン交換基の違い／緩衝液の分離／生体高分子の分離　
　11章　サイズ排除分離のコツ
　　サイズ排除クロマトグラフィーの分離原理
　　標準試料と分子量計算
　　カラムの選択方法
　　溶媒の選択方法
　　　有機系ＳＥＣ／水系ＳＥＣ
　　ちょっとしたコツ
　　　ピークでないピーク（較正曲線のひずみ）／オリゴマー領域の較正曲線（較正曲線）／ゴーストピーク（溶媒の安定性）／雨の日のＳＥＣ測定（溶離液溶存水分）／脱気してはいけない話（溶存ガスと屈折率）／台風とＲＩ検出器（気圧と屈折率）／流速の変化（送液ポンプ）／高分子は切れやすい（試料調整法）／濃度効果による分子量の低下（試料濃度）／カラムの使用耐圧（カラムの取扱い）
第III部　液クロ検出・解析編
　12章　吸光度検出器を使うコツ
　　吸光度検出器の光学系の構造
　　検出波長の決め方
　　有機化合物の構造と吸収波長との関係
　　測定可能な吸光度の上限
　　吸光度検出器の機種・機体間における感度差
　　移動相溶液の流量と吸光度検出器の感度との関係
　　移動相中の溶存空気が吸光度検出器のベースラインに与える影響
　　試料溶液中の溶存空気がクロマトグラムに与える影響
　　溶液の屈折率の影響
　　室温の変化が吸光度検出の測定結果に与える影響
　　グラジエント溶離におけるゴーストピーク
　　フォトダイオードアレイ検出器の特徴
　　トラブルシューティング
　　　ＳＮ比が悪くなる原因／ベースラインのドラフト／光源ランプの交換時期／フローセルの汚れ
　13章　蛍光検出器を使うコツ
　　蛍光検出とは
　　発蛍光性と化合物の構造との関係
　　蛍光検出器の光学系
　　励起波長と蛍光波長の関係
　　励起波長と蛍光波長の決め方
　　蛍光検出の一般的な感度
　　蛍光検出器の感度を左右する要因と感度の評価方法
　　蛍光検出の感度に及ぼす移動相の溶存空気量の影響
　　蛍光検出の感度に及ぼす室温変化の影響
　　ポストカラム誘導体化を伴う蛍光検出
　　高温（100℃以上）でのポストカラム誘導体化の注意点
　　トラブルシューティング
　　　ＳＮ比の低下／免責地のばらつきが大きく，再現性がない／クロマトグラム上に針状またはのこぎり状のノイズが発生
　14章　電気化学検出器を使うコツ
　　検出原理
　　　印加電圧
　　検出器の構造
　　　作用電極／作用電極のサイズ／参照電極／セルブロックのスペーサー／補助電極
　　検出モード
　　　直流モード／パルスモード／パルス条件の最適化／スキャンモード
　　システムの構成
　　　ＨＰＬＣ送液ポンプ／移動相の脱気／恒温槽／室温／アース／電源／検出器ノイズのフィルター／適切な時定数
　　システムの準備，測定
　　　ＨＰＬＣシステムの洗浄／カラムの洗浄／逆相系の場合の例／分析開始後のポイント／検出器の停止
　　メンテナンス
　　　作用電極／グラッシーカーボン／金属作用電極／参照電極／補助電極／カラムの交換／トラブルシューティング
　15章　ＬＣ/ＭＳのコツ
　　　試料前処理のコツ
　　　　ＬＣカラムを使用しない測定／ＬＣカラムを使用する測定
　　　溶離液選択のコツ
　　　　有機溶媒／緩衝液／順相ＬＣ用溶媒
　　　チューニング最適化のコツ
　　　　電圧系のチューニング／温度やガス量の調整／ハードウェア系の調節
　　　スペクトル解析（分子量決定）のコツ
　　　　付加イオンの利用／分子量関連イオンを観測するコツ
　　　構造解析のコツ
　　　定量分析のコツ
　　　　内部標準物質の必要性／内部標準物質の種類／付加イオンの利用／マスクロマトグラムの利用
　　　配管接続のコツ
　　　　１/16インチユニオンとフェーズドシリカとの接続／フェーズドシリカどうしの接続／マイクロシリンジと１/16インチユニオンとの接続
　　　メンテナンスのコツ
　　　　イオン源の分解・洗浄／排気系メンテナンス
　16章　データ整理・解析のコツ
　　　データ処理装置の概要
　　　データ取り込みのコツ
　　　ピーク検出のコツ
　　　ベースライン処理のコツ
　　　　ベースラインＮ法／ピークの分割方法／マニュアルベースライン補正／スムージング
　　　不分離ピークの算術的分離法（ピークデコンボリューション）
　　　定量計算のコツ
　　　デーータ整理を上手に行うために

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