内容紹介
１冊ですべてのラボワークに対応できる。組換えDNA実験をもっとも効果的に、失敗なく行うための座右のマニュアル。新版では新しい知見を取り入れ、現在使われている方法、信用できるキットを使った方法を、初心者が読んで実験できるようにまとめた。プロトコールどおりに行ってうまくいかない場合のチェックポイントについても述べている。第I部に技術の基本となる必須の操作法を、第II部に遺伝子操作の基本技術・応用技術を記している。
目次
１ 序論
１ 遺伝子工学の展開とバイオサイエンス
２ 遺伝子工学の方法論
３ 遺伝子操作実験の心構え
２ 実験の安全と器具・試薬
１ 安全
２ 滅菌と消毒
３ 器具
４ 試薬類
第I部 基本操作
３ 除タンパク質，濃縮，緩衝液交換
１ 水飽和フェノールの作り方
２ フェノール・クロロホルム抽出
３ エタノール・イソプロパノール沈殿
４ その他の濃縮法
５ ゲル濾過法
６ 透析
４ 電気泳動
１ アガロースゲル電気泳動
２ ポリアクリルアミド電気泳動
３ ゲルからのＤＮＡの抽出
５ 核酸（ＤＮＡ及びＲＮＡ）の定量法
１ 光学的方法（核酸の紫外吸収を利用したもの）
２ 電気泳動で調べる方法
３ 液滴中の拡散を定量する方法
６ 分子生物学における酵素の使い方
１ 酵素の種類と使用上の注意
２ 酵素反応
７ 大腸菌の取り扱い方
１ 遺伝子型（genotype）の読み方
２ 培養
３ 保存と輸送
４ 大腸菌の遺伝子導入
８ 酵母の扱い方
１ 基礎的知識
２ 培養方法
３ ＤＮＡ形質転換法
９ 動物細胞の扱い方
１ 培地作成
２ 細胞培養
第２部 組換えＤＮＡ技術・基礎編
10 プラスミドＤＮＡの調製
１ プラスミドの少量調製
２ プラスミドの大量調製
３ キットを用いる方法
11 λファージＤＮＡの調製
１ ファージtiterの測定法（ファージの滴定）
２ ファージＤＮＡの少量調製
３ ファージＤＮＡの大量調製
４ キットを用いたファージＤＮＡの調製
12 核酸の標識法
１ マルチプライム法
２ 末端の標識
３ ゲル濾過
４ 非ＲＩ標識を用いる方法
13 ゲノムＤＮＡの調製法とサザンハイブリダイゼーション
１ ゲノムＤＮＡの調製法
２ サザンハイブリダイゼーション
14 巨大ＤＮＡ断片の解析法（パルスフィールド電気泳動法）
１ サンプルの調製
２ レアーカッター制限酵素処理
３ パルスフィールドゲル電気泳動法による解析
15 ＰＣＲ法の原理と基本操作
16 ＲＮＡの調製
１ チオシアン酸グアニジン・セシウム塩遠心法
２ ＡＧＰＣ法
３ キットを用いる方法
17 特異的ＲＮＡの検出と定量
１ ノーザンブロット
２ ＲＮａｓｅプロテクションアッセイ
３ ＲＴ―ＰＣＲ法
４ 定量リアルタイムＰＣＲ
18 ｃＤＮＡライブラリーの作製とｃＤＮＡクローニング
１ オリゴ（ｄＴ）セルロースカラムによるポリ（Ａ）+ＲＮＡの調製
２ ショ糖密度勾配遠心による分画
３ ｃＤＮＡの合成
４ クローン化されたＤＮＡプローブによるλｇｔ10ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング
５ ＲＴ―ＰＣＲによるクローニング
19 ゲノムＤＮＡのクローニング
１ ＰＣＲを用いクローニング
２ ファージベクター
20 サブクローニング
１ ベクターの調製
２ 挿入ＤＮＡの調製
３ ベクター・挿入ＤＮＡのライゲーション，トランスフォーメーション
４ スクリーニング
21 ＤＮＡシークエンスの原理と方法
１ 原理
２ 方法
22 タンパク質の電気泳動
１ ＳＤＳ―ポリアクリルアミド電気泳動とウェスタンブロット法
２ 二次元電気泳動法とプロテオーム解析
第III部 組換えＤＮＡ技術・応用編
23 in vitro転写系
１ ＨｅＬａ細胞粗抽出液の調製
２ 組織からの核抽出液の調製
３ in vitro転写反応と反応物の検出
24 ゲルシフト分析
１ 少量の細胞からの核抽出液の調製
２ アッセイ法
25 クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）法
26 ＤＮＡ導入による遺伝子機能の解析
１ ＤＮＡ導入の方法
２ レポーターアッセイ
３ 安定トランスフォーマントの作製
27 アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉ（ｓｉＲＮＡ）による遺伝子機能の解析
１ アンチセンスオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴ）
２ ｓｉＲＮＡ
28 動物細胞での発現遺伝子抗原の確認
１ キャリアータンパク質・タグ分子の選択
２ 細胞内分子の検出
３ 細胞膜表面分子の検出
29 人工変異導入法
１ はじめに
２ オリゴヌクレオチド指定変異法（Kunkel法）
３ ＳＯＥ法
４ キット類
30 特異的なＤＮＡ―タンパク質間の相互作用を利用したＤＮＡ結合タンパク質の精製法
１ ＤＮＡの調製
２ ＣＮＢｒ活性化SepharoseへのＤＮＡの結合
３ カラムを用いたタンパク質の精製
31 大腸菌でのンパク質の大量発現とその精製法
１ 発現ベクターの作成
２ グリセロールストックの作成
３ パイロット実験
４ 発現・精製
５ ６×Ｈｉｓの切断分離
６ 実験例
32 タンパク質間結合の検出法
１ ＧＳＴ―プルダウン法
２ 免疫沈降法
33 酵母を利用した特異タンパク質のクローニング
１ two―hybrid法
２ one―hybrid法
３ プラスミド回収法
34 ＤＮＡ多型と遺伝子変異の検出法
１ ＤＮＡ多型の意義
２ データベース上での多型の検索方法
３ ＤＮＡ変異の検出
４ ＤＮＡフィンガープリント法
５ Taqman法
６ インベーダ法
７ パイロシークエンシング法
35 ＤＮＡマイクロアレイを用いた発現解析
１ ｃＤＮＡマイクロアレイとオリゴヌクレオチドアレイ
２ ｃＤＮＡマイクロアレイを用いた実験例
36 遺伝子工学におけるコンピュータの利用
１ 分子生物学，分子医学におけるコンピュータとネットワークの利用
２ コンピュータを利用した遺伝子解析
付録（タグ一覧表/文部科学省組換えDNA実験指針とその例/実験室の安全）
